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6163银河客户发表文章获高分
发布日期：2013-05-22浏览：
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The American Journal of Human Genetics. June.6.2013
Mutations in POFUT1, Encoding Protein O-fucosyltransferase 1, Cause Generalized Dowling-Degos Disease. (IF: 10.603)
Ming Li,1 Ruhong Cheng,1 Jianying Liang,1 Heng Yan,2 Hui Zhang,1 Lijia Yang,3 Chengrang Li,4
Qingqing Jiao,1 Zhiyong Lu,1 Jianhui He,5 Jin Ji,3 Zhu Shen,2 Chunqi Li,5 Fei Hao,2 Hong Yu,1,*
and Zhirong Yao1,*
文章链接http://dx.doi.org/10.1016/j.ajhg.2013.04.022
背景
1，课题组在国际上首次确定了POFUT1基因为泛发性屈侧网状色素异常的致病基因，并证实该基因在黑素合成和转运方面发挥重要作用。
2，课题组首次揭示了POFUT1基因以及Notch信号通路在人类黑素合成与转运的作用，为疾病的分子诊断、预防与治疗,以及探索人类色素性疾病的发病机制奠定了基础。
研究方法
1. DDD大家系采血，对样本抽提DNA
2. 利用SNP芯片进行家系的连锁分析，找出疾病的候选区域
3. 利用全外显子测序技术，筛选得出两个候选基因
4. 利用Sanger测序，确定POFUT1基因的突变导致DDD的发生，并在另一个家系中得到验证
5.敲除掉POFUT1基因，构建疾病斑马鱼模型，充分验证了pofut1基因对黑素合成与转运的重要作用。
分析结果
1.为了确定泛发性褶皱部网状色素异常（DDD）致病基因的候选基因，课题组对家系1中的14名成员进行芯片实验,通过家系连锁分析找出候选基因区域
Fig3A. Haplotype analysis of family 1. Haplotype indicates heterozygosity between rs1293713 and rs244123 in affected family members. The recombination events defined the susceptibility region in 20p11.21–20q13.12 to a 14.79 cM interval. Red bars indicate the chromosomal region shared by affectedmembers of the pedigree.
2.将高通量测序筛选到的候选位点 进行Sanger测序验证 ，最终找到在两个家系中共有的致病基因POFUT1
Fig3(C) Fig3(D)
Fig3(C and D). POFUT1 mutations in the two families: c.430G>T (p.Glu144*) in family 1 (C) and c.482delA (p.Lys161Serfs*42) in family 2 (D). The black arrows indicate mutations.
3.利用反义吗啡啉基因沉默技术，成功构建了疾病的斑马鱼模型，充分验证了pofut1基因对黑素合成与转运的重要作用。
Fig4( C)
Fig4( D)
Fig4 (C and D). Zebrafish phenotype observation at 48 and 72 hpf. The melanin contents in the zebrafish tail at 48 hpf (C) and in both the tail and body axis at 72 hpf (D) decreased significantly in the pofut1-MO group compared with controls, and the melanin distribution in the zebrafish tail was presented as dispersion in the pofut1-MO group (D). The black arrow indicates abnormal melanin distribution in the zebrafish fin.
